Het juiste UV-gelbeeldvormingssysteem kiezen voor duidelijke en reproduceerbare resultaten

Als banden zwak zijn, de achtergrond hoog is of beelden slecht worden belicht, kan zelfs een succesvolle elektroforeserun moeilijk te interpreteren zijn. De beeldkwaliteit is een cruciale factor voor de verificatie van de resultaten, het terugvinden van het monster, rapportage en voor experimenten met reproduceerbare resultaten voor laboratoria die DNA-, RNA- of eiwitgels uitvoeren.

Een UV Gel Imaging System bestaat uit de volgende componenten: gecontroleerde verlichting, lichtdichte kast, optische filters, gevoelige camera en analysesoftware. Het is dus niet voldoende om de cameraresolutie te vergelijken bij het kiezen van welk systeem je kiest. De koper moet het hele beeldvormingsproces meenemen, van vlekexcitatie tot de export van de data.

Wat is een UV-gel dan? Imaging Systeem?

Een UV-gelbeeldvormingssysteem is ontworpen voor de visualisatie en documentatie van DNA-, RNA- of eiwitbanden na gelelektroforese. Door UV-verlichting, een camera met hoge gevoeligheid, optische filters en beeldanalysesoftware te combineren, stelt het systeem gebruikers in staat gelbeelden duidelijk vast te leggen en de bandpositie, helderheid en molecuulgrootte te analyseren. Het wordt veel gebruikt bij PCR-verificatie, nucleïnezuurelektroforese, restrictiedigestie-analyse en routinematige moleculaire biologische experimenten.

Een gesloten beeldvormingssysteem maakt gecontroleerde opname, analyse, etikettering, opslag en export mogelijk, wat niet mogelijk is met een eenvoudige UV-kijkbox. De Gelbeeldvormingssysteem (GI-200) van Longlight combineert al deze functies in één laboratoriumbeeldvormingssysteem voor dagelijkse laboratoriumbeeldvorming.

Waarom verlichting en kleurcompatibiliteit belangrijk zijn zijn belangrijk

Een goede UV-bron is niet per se de beste voor het maken van een goed beeld. De excitatiegolflengte moet overeenkomen met de geselecteerde kleuring en er moet een optisch filter zijn dat de uitgezonden fluorescentie doorlaat. Deze mismatch kan leiden tot zwakke banden, hoge achtergrond- of valse verschillen tussen banen.

302 nm UV wordt vaak gebruikt voor veel conventionele nucleïnezuurkleuringen, terwijl andere golflengten of blauw licht de voorkeur kunnen hebben, afhankelijk van de kleurstof en de latere toepassing. Het is belangrijk dat laboratoria de compatibiliteit van de kleurstof bevestigen en niet één golflengte per assay gebruiken. De Longlight-gids voor het kiezen van een UV-transilluminator informeert u over de golflengte, de uniformiteit van de verlichting en het kijkgebied en hoe deze de resultaten beïnvloeden.

Beoordeel de camera als een Volledig Beeldvormingsketen

Megapixels worden gebruikt om beeldafmetingen aan te geven, maar zijn niet alleen prestatie-indicatoren. Het vermogen om zwakke en sterke banden in hetzelfde beeld op te nemen, is afhankelijk van de gevoeligheid en signaal-ruisverhouding van de sensor, samen met de kwaliteit van de lens en de keuze van filters, het dynamisch bereik en de uniformiteit van de verlichting.

Als routinematige PCR-tests worden uitgevoerd, kan een duidelijke bandafstand voldoende zijn. Voor monsters met een lage abundantie en semi-kwantitatieve vergelijkingen is minder ruis en een groter dynamisch bereik vereist. Gebruikers moeten vragen om foto's te zien die door de gebruiker zijn gemaakt met hun type gel en kleur, in plaats van te vertrouwen op een resolutieblad.

DNA-bescherming Tijdens Beeldvorming en gelexcisie

Nucleïnezuren kunnen beschadigd raken door UV-blootstelling, vooral als de gel tijdens het doorsnijden van de banden nog steeds aan UV wordt blootgesteld. Dit kan de efficiëntie van klonen verminderen of invloed hebben op gevoelige downstream-toepassingen. Daarom moeten blootstellingen worden geminimaliseerd.

Laboratoriumflexibiliteit wordt geboden door een systeem dat twee modi biedt: UV en blauw licht. UV is geschikt voor bekende kleuringen en voor regelmatige documentatie, maar blauw licht kan de voorkeur hebben wanneer DNA uit de gel wordt teruggewonnen, mits er een blauwlicht-compatibele nucleïnezuurkleuring wordt gebruikt. Voor meer details, zie Longlight's hoge-resolutie gelbeeldvorming en UV-veilige gelexcisiegids.

Maak UV-veiligheid tot een aankoopvereiste

De ogen en huid kunnen beschadigd raken door directe of gereflecteerde UV-straling. Een gesloten beeldkastje met UV-blokkerende panelen en deurvergrendelingen kan onbedoelde blootstelling aan UV-straling verminderen.

Laboratoriumprocedures zijn geen vervanging voor veiligheidsvoorzieningen. Echter, passende persoonlijke beschermingsmiddelen, training, waarschuwingsborden en gedocumenteerde werkwijze zijn vereist van gebruikers. Maar een goed ontworpen behuizing maakt het makkelijker om correct te handelen en vermindert de blootstelling tijdens de routinematige beeldopnames.

Het systeem komt overeen met de Laboratorium Werkwijze

Laboratoria moeten hun gewenste resultaat van het resulterende beeld vaststellen voordat ze een aankoop doen. Misschien moet het onderwijslab de resultaten snel zien, of misschien wil het gereguleerde of onderzoekslab herhaalbare acquisitie-instellingen, gebruikersgegevens, annotaties en doorzoekbare bestanden.

Voordelen van de workflow zijn onder andere autoexposure, autofocus, ladderdetectie, beeldoptimalisatie, automatische bestandsbenaming, datatransfer en auditsporen. Overweeg multi-lichtbron-elektroforese gelbeeldvorming voor het multi-assay lab, wat ook de noodzaak van aparte instrumenten kan verminderen.

Probeer het uit met de echt Monsters!

Een demonstratie moet niet alleen een "laboratorium" gel bevatten, maar ook "normale" omstandigheden simuleren. Test zwakke en sterke banden naast elkaar, vergelijk dezelfde monsterbanden op verschillende delen van het podium en vergelijk de automatische instelling met een gevalideerde handmatige instelling.

Kijk of het systeem zwakke banden detecteert zonder sterke banden te verzadigen. Houd ook rekening met achtergronduniformiteit, scherpstelconsistentie, nauwkeurigheid van annotatie, exportsnelheid en het gemak van schoonmaken. Deze tests zouden de prestaties in de praktijk beter moeten aantonen dan camera's op specificatiebladen.

Standaardiseren Imaging Na installatie

Zelfs het meest competente systeem verschilt per gebruiker als gebruikers de vlekken, belichtingen, filters en andere bestandsafhandeling aanpassen zonder dit te documenteren. Laboratoria zouden beeldvormingstechnieken moeten ontwikkelen die specifiek zijn voor elke toepassing en gevalideerde instellingen opslaan, indien beschikbaar door de software.

De volgende routinecontroles worden aanbevolen: beeldvormingsoppervlak, verlichtingsuitgang, focus, filters, opslagcapaciteit en veiligheidsvergrendeling. Het is ook nuttig om de onderhoudsdata vast te leggen, omdat dit kan helpen om instrumentdrift te onderscheiden van kleuring of veranderingen in de monstervoorbereiding.

Als je al bent Heb Een systeem, wat zijn de tekenen dat het tijd is om een nieuw systeem te nemen?

Vervanging kan gerechtvaardigd zijn als zwakke banden consequent worden gemist, er ongelijke belichting is, belichtingsinstellingen niet kunnen worden gerepliceerd en/of afbeeldingsbestanden metadata missen om controle te vergemakkelijken. De voortdurende onderhoudsbehoeften en het feit dat oudere platforms mogelijk minder vlekken zijn dan nieuwere, kunnen ook oplopen tot de totale kosten van een ouder platform.

Herhaalde experimenten, tijd van de operator, veiligheidsbeperkingen en datamanagementbehoeften moeten worden gebruikt om de beslissing te nemen – NIET alleen de leeftijd van de apparatuur. Laboratoria die een upgrade overwegen kunnen roep Longlight Om hun monsters, vlekken, gelformaten en documentatievereisten te bespreken.

Conclusie

De camera met de hoogste resolutie is niet per se het beste UV-gelbeeldvormingssysteem. Het is het systeem dat licht koppelt aan kleurchemie, bandverzadiging voorkomt, de gebruiker en de monsters beschermt en consistente records achterlaat.

Laboratoria kunnen een monstergebaseerde demonstratie of een specificatiereview gebruiken die zich richt op workflows om een platform te kiezen dat betrouwbare resultaten levert tussen operators en experimenten.

Veelgestelde vragen

Q1. Wat is het doel van een UV-gelbeeldvormingssysteem?

Het vangt gekleurd DNA, RNA of eiwitgels na elektroforese. De gemaakte beelden worden vervolgens geanalyseerd, gedocumenteerd, vergeleken en geëxporteerd.

Q2. Is het zinvol om UV-beeldvorming te gebruiken om DNA terug te winnen?

Het kan worden gebruikt, maar er moet worden ingezet om de blootstelling te minimaliseren omdat UV DNA kan beschadigen. Voor gel-excisies en daaropvolgende klonen is het vaak beter om in blauw licht te fotograferen met een compatibele kleur.

Q3. Waarom zijn de gelbanden op de vastgelegde foto vaag?

Dit kan te wijten zijn aan een lage monsterconcentratie, een mismatch tussen kleur en licht, een ongeschikt filter, onjuiste belichting, oude lampen of veel achtergrondlicht. De volledige optische opstelling moet worden gecontroleerd voordat het experiment wordt herhaald.

Q4. Hoe meer megapixels een camera heeft, hoe beter het beeld is, toch?

Helemaal niet, er zijn verschillende andere factoren zoals gevoeligheid, ruis, dynamisch bereik, kwaliteit van lens/filters en uniformiteit van de verlichting. Controleer echte foto's in plaats van megapixels.

Q5. Wat is de aanbevolen frequentie voor beeldvormingscontroles van een beeldvormingssysteem?

Routinecontroles moeten de schoonheid van het beeldoppervlak omvatten, de uniformiteit van de verlichting, scherpstelling, filters, veiligheidsvergrendelingen en beeldconsistentie.