Thuis / Product / Eiwit toepassingen / Proteomics-ondersteuning / Cryo-elektronenmicroscopiedienst

Cryo-elektronenmicroscopiedienst

Cryogene elektronenmicroscopie (cryo-EM) is een geavanceerde techniek in de structurele biologie waarmee wetenschappers de precieze details van biologische macromoleculen kunnen visualiseren. Cryo-EM is gebaseerd op transmissie-elektronenmicroscopie met bijna atomaire resolutie. Toenemende marktvraag in tal van biomedische toepassingen, bijvoorbeeld geneesmiddelenontwikkeling, antilichamen, vaccins enzovoort.

Ontvang gratis offerte

Cryo-EM Waarde Structurele oplossingen One-Stop Workflow Vertrouwde platforms Waarom voor ons kiezen

Voordelen van cryo-EM ten opzichte van röntgenkristallografie

Ondanks dat röntgendiffractie nog steeds een iets hogere resolutie kan bereiken, vertoont cryo-EM aanzienlijke voordelen:

Er is een minimale hoeveelheid monster nodig.
Geen noodzaak voor kristallisatie.
Geen synchrotronbron van röntgen nodig.
Behoud van de bijna-inheemse staat.
Evaluatie van de flexibiliteit.
Geschikt voor deeltjes die moeilijk te kristalliseren zijn, zoals membraaneiwitten of supramoleculaire assemblages (bijv. virus).
De heterogeniteit van conformaties kan in één enkel exemplaar worden opgelost.
Laag zuiverheidsniveau geaccepteerd.

Exponentiële groei van het aantal vermeldingen in EMDB:

Structurele oplossingen

Voorbeeldgeschiktheidsbeoordeling – Negatieve vlek

Voordat belangrijke microscoopmiddelen worden ingezet in cryo-EM, wordt een negatieve kleuringsinspectie meestal uitgevoerd bij kamertemperatuur en lage spanning. Deze stap maakt het mogelijk om de geschiktheid van het monster te beoordelen, inclusief homogeniteit, aggregatie, deeltjesmorfologie, grootte en verdeling, met behulp van een kleurmiddel met hoge elektronendichtheid.

Negatieve kleuring dient als een cruciale kwaliteitscontrolestap om te beoordelen of een monster geschikt is voor downstream cryo-EM gegevensverzameling.

Structuurbepaling met hoge resolutie – Enkeldeeltjesanalyse (SPA)

Cryo-EM gegevensverzameling genereert doorgaans ongeveer 10⁴ tot 10⁶ individuele tweedimensionale projecties van deeltjes die in verschillende oriëntaties worden vastgelegd. Deze projecties worden computationeel uitgelijnd en geclassificeerd via een beeldverwerkingsworkflow om een driedimensionale dichtheidskaart te reconstrueren met subnanometrische of bijna-atomaire resolutie.

Vervolgens wordt een atomair model gebouwd, verfijnd en gevalideerd binnen de gereconstrueerde dichtheidskaart, wat structurele inzichten biedt in de functionele mechanismen van het biologische macromolecuul van belang.

In situ structurele analyse – Cryo-elektrontomografie (Cryo-ET)

Cryo-elektronentomografie maakt driedimensionale visualisatie van biologische structuren mogelijk in hun oorspronkelijke cellulaire of virale context. Deze benadering is bijzonder geschikt voor het bestuderen van grote macromoleculaire assemblages, membraan-geassocieerde complexen en mechanismen voor virale infecties, en biedt ruimtelijke en organisatorische informatie die niet toegankelijk is met enkeldeeltjesmethoden.

Serviceworkflow

Projectconsultatie → het ondertekenen van → serviceovereenkomst door de NDA, bevestiging → monster ontvangen → kwaliteitsinspectie → negatieve kleurscreening → cryo-EM gegevensverzameling → gegevensverwerking → rapportage.

Data & Resultaatresultaten

Volledige beschikbaarheid van data wordt gedurende de hele projectlevenscyclus geboden. Geleverde materialen omvatten ruwe cryo-EM-films met gainreferentiebestanden, tussenliggende databestanden in verschillende stadia van dataverwerking, definitieve driedimensionale dichtheidskaarten met resolutie- en kwaliteitsmetriek, atomaire coördinatenmodellen waar van toepassing, en kruisvalidatierapporten zoals MolProbity-beoordelingen.

Alle data kan worden geleverd via draagbare opslagapparaten of beveiligde cloudgebaseerde platforms.

Drie Belangrijke Uitrusting

Onze cryo-EM-diensten worden ondersteund door toegang tot hoogwaardige wetenschappelijke onderzoeksplatforms uitgerust met geavanceerde instrumentatie.

Beschikbare systemen zijn onder andere Talos L120C G2, een instapniveau transmissie-elektronenmicroscopie- en cryo-EM-screeningsplatform; Gletsjers 2, een 200 kV werkpaard cryo-EM systeem geoptimaliseerd voor routinematige enkeldeeltjes- en tomografieworkflows; en Titan Krios G4, een vlaggenschip 300 kV cryo-EM platform ontworpen voor maximale stabiliteit, automatisering, doorvoer en resolutiepotentieel.

Deze platforms ondersteunen gezamenlijk cryo-grid screening, single-particle analyse, cryo-elektrontomografie en geavanceerde methodeontwikkeling voor een breed scala aan structurele biologische toepassingen.

Waarom Longlight?

Wij bieden waardevolle en volwassen ervaring in cryo-elektronenmicroscopie via toegang tot hoogwaardige wetenschappelijke onderzoeksplatforms en samenwerking met experts uit de industrie en academische wetenschappelijke adviseurs. Onze diensten leggen de nadruk op volledige transparantie en volledigheid van gegevenslevering, waaronder ruwe data, tussenliggende verwerkingsbestanden, uiteindelijke dichtheidskaarten, atomaire modellen en validatierapporten.

Door geavanceerde instrumentatie, ervaren dataverwerkingsworkflows en evenwichtige leveringstijden te combineren, bieden wij betrouwbare, hoogwaardige cryo-EM structurele oplossingen die zijn afgestemd op diverse onderzoeksbehoeften.

Veelgestelde vragen.

V1: Hoeveel steekproef moeten klanten voorbereiden?

Negatieve kleuring:

minimale concentratie ~1 g/L

minimaal volume ~100 μL.

SPA met oplosbare eiwitten:

minimale concentratie ~1 g/L

minimaal volume ~100μL.

SPA met membraaneiwitten:

minimale concentratie ~1 g/L

minimaal volume ~100μL.

besproken en aangepast indien nodig

V2: Wat zijn de vereisten voor sample buffer?

pH-bereik: 6,0-8,5
zoutconcentratie <200 mM
Lage glycerol (hoeveel? DOI: 10,1107/S2053230X24002553)
Lage azide (hoeveel? ondersteunende referentie ontbreekt)

V3: Wat is een typisch dienstproces?

Projectconsultatie → het ondertekenen van een → serviceovereenkomst door de NDA, bevestiging → monster dat → kwaliteitsinspectie ontvangt → negatieve kleuring → gegevensverzameling → gegevensverwerking → rapportage.

V4: Wat is de gemiddelde levertijd?

Negatieve kleuring: 1-2 weken.
SPA, voorlopige resultaten: 6-8 weken.
SPA, high-resolution model: 2-3 maanden.

ChIP-seq

ChIP bestudeert de interactie tussen DNA en eiwitten, en ChIP-seq wordt gecombineerd met sequencing van de volgende generatie om DNA-plaatsen in het genoom te detecteren die binden aan specifieke transcriptiefactoren/histonen, die worden gebruikt om de interactie tussen eiwitten en chromatine te bestuderen.

Genomica

Longlight heeft zich gericht op moleculaire diagnose en moleculaire biologie, we hebben een aantal NGS-gerelateerde instrumenten en verbruiksartikelen voor reagentia gelanceerd, voornamelijk Focused Ultrasonicator, die zich inzetten voor het bevorderen van de ontwikkeling van genomica, om de menselijke medische zaak beter te dienen.

Verbruiksartikelen en kits

Longlight biedt verschillende soorten geprefabriceerde agarosegel, nucleïnezuurvanger, Qubit-buis, nucleïnezuurextractiekits en bibliotheekvoorbereidingskits. In de tussentijd kunnen al deze producten op grote schaal worden gebruikt in fundamenteel wetenschappelijk onderzoek, biofarmaceutica en andere toepassingsscenario's.