Hoe de elektroforesetijd van nucleïnezuur te verkorten tot 10 minuten?

Nucleïnezuurelektroforese is vaak langzamer dan nodig is - het steelt tijd, oververhitte gels en stelt beslissingen in drukke laboratoria uit.

De pijn: waarom gels te lang duren

De meeste teams accepteren runs van 30 - 60 minuten als "normaal". Maar lange runs verbergen echte kosten. Warmte bouwt zich op, banden vervagen en je verliest tijd tussen PCR en de volgende stap. Klassieke TAE/TBE-buffers zijn niet ontworpen voor snelheid bij hogere veldsterktes. Druk op de spanning en de gel warmt op; Als je langer pusht, loop je het risico op een vervormde migratie of slecht herstel. Het opnieuw uitvoeren van een gel om uitsmeren te verhelpen kost meer dan minuten - het vermindert het vertrouwen en verstopt uw workflow.

Uit gesprekken met klanten horen we steeds weer dezelfde pijnpunten. Onderzoekers willen snellere controles van PCR-producten, high-throughput schermen die niet vastlopen en schone banden die rechtstreeks naar ligatie of gelherstel kunnen gaan. Inkoop wil verbruiksartikelen die lang meegaan en niet constant hoeven te worden vervangen. Bij Longlight Technology stelden we een eenvoudige vraag: wat als nucleïnezuurelektroforese betrouwbaar in 5 tot 10 minuten zou kunnen worden voltooid zonder dat dit ten koste gaat van de downstreamprestaties?

❓ Wat Labs ons vertellen?

Oververhitting, inconsistente buffersterkte tussen werpen en rennen, en angst voor stroomafwaartse stappen beperken de snelheid. Teams aarzelen om buffers te vervangen omdat ze zich zorgen maken over ligatie, extractieopbrengst of RNA-stabiliteit. U hoeft niet te kiezen tussen snelheid en kwaliteit.

(Figuad 1. Aanbrengen van Super Fast Running Buffer op 0,8% Agarose Gel. Rijstrook 1: D12000

ladder (5 μL); Baan 2: 4 μL; Baan 3: 3 μL; Baan 4: 2 μL; Baan 5: 1 μL)

(Cijfer 2. Toepassing van supersnelle buffer op

1% Agarose Gel. Baan 1: D5000 ladder (5 μL); Baan 2: 4 μL; Baan 3: 3 μL; Baan 4: 2 μL; Baan 5: 1 μL)

(Figuur 3. Toepassing van supersnelle buffer op

2% Agarose Gel. Baan 1: D1000 ladder (5 μL); Baan 2: 4 μL; Baan 3: 3 μL; Baan 4: 2 μL; Baan 5: 1 μL.)

• Super Fast Running Buffer is volledig compatibel met verschillende concentraties agarosegels (0,8%, 1%, 2%), zoals weergegeven in afbeelding 1–3. Ongeacht de gelconcentratie behouden nucleïnezuurbanden een uitstekende resolutie en helderheid, waardoor de experimentele behoeften voor het scheiden van DNA-moleculen van verschillende grootte worden gegarandeerd.

De oplossing: supersnelle buffer uitgelegd

Ons 50x Supersnelle lopende buffer is een formulering met een lage ionensterkte die speciaal is gebouwd voor agarose nucleïnezuurelektroforese. Minder ionische belasting betekent minder warmte op een bepaald veld. Combineer het met de juiste agaroseconcentratie en je kunt vol vertrouwen werken met een snelheid tot 25 – 30 V/cm, waarbij je een run die vaak 30 minuten duurt comprimeert tot slechts 5 – 10 minuten. Bij head-to-head gebruik zien teams doorgaans ~2,5 – 3x snellere scheidingen dan standaard 1x TAE of 1x TBE.

Hoe het werkt

Een lagere ionensterkte vermindert de verwarming van de Joule en helpt bij het behouden van scherpe banden bij een hogere spanning. Die thermische stabiliteit behoudt de resolutie voor DNA en RNA en maakt snelheid mogelijk. Net zo belangrijk is dat de chemie stroomafwaarts vriendelijk is: het interfereert niet met de extractie of ligatie van DNA-gels, dus je kunt direct overgaan op klonen, opruimen of kwantitatief zijn.

• Snelle doorlooptijd: 5 – 10 minuten draait met 25 – 30 V/cm

• Scherpe banden: hoge resolutie, zelfs bij hoge veldsterktes

• Downstream Compatibiliteit: Geen invloed op het herstel van de gel of ligatie

• Hoger herstel: overtreft vaak de TAE/TBE-herstelprestaties

• Herbruikbare buffercapaciteit: sterke buffering voor meervoudig gebruik

• Snelle installatie

Verdun de buffer 1:50 om een 1x werkoplossing te bereiden (bijv. 20 ml 50x in 980 ml gedestilleerd water). Bewaar de 1x bij kamertemperatuur. Gebruik voor de beste consistentie dezelfde batch van 1x om de gel te gieten en uit te voeren; Het mengen van verschillende batches kan de buffersterkte op de gelinterface veranderen. Niet verdunnen onder 1x – dat nodigt uit tot abnormale migratie.

Bedrijfsomstandigheden

Draai op 25 – 30 V/cm gellengte en pas aan op basis van de geometrie en het thermische gedrag van uw aquarium. Zoals bij elke run op hoog veld, moet u uw voedingslimieten bevestigen; Als de stroom of spanning daalt, controleer dan of het instrument de stroom of het vermogen afgrenst. Vlekken zijn flexibel: voeg kleurstof toe aan de gel of vlek na het hardlopen - beide werken.

• Veiligheid en stabiliteit

Continu draaien of hoge omgevingstemperaturen kunnen de buffertemperatuur verhogen. Koel het apparaat indien nodig af of plaats het op ijs om de resolutie te beschermen. Vervang de buffer regelmatig om de nauwkeurigheid te behouden. Bewaar zowel 50x voorraad als 1x werkoplossingen bij kamertemperatuur; Onder de aanbevolen omstandigheden is de stabiliteit ten minste 12 maanden na ontvangst. Draag zoals altijd een laboratoriumjas en wegwerphandschoenen. Dit product is bedoeld voor onderzoek door professionals.

Echte winsten en hoe te beginnen

Wanneer de snelheid betrouwbaar is, verbetert alles stroomafwaarts. Met een gel van 5 - 10 minuten kunt u de PCR controleren, een bibliotheekvoorbereiding aanpassen of een ligatie valideren zonder de dag te laten ontsporen. Voor groepen met een hoge doorvoer ontstoppen snellere gels wachtrijen en verhogen ze de doorvoer. Dat betekent meer gegevens voor de lunch - en minder herhalingen 's avonds.

Bij Longlight Technology hebben we deze buffer gebouwd om teams te helpen de lus tussen hypothese en resultaat te verkorten. In proefimplementaties rapporteerden laboratoria schonere banden op hogere velden, soepelere overdrachten naar ligatie en een verbeterde gelextractieopbrengst in vergelijking met oudere buffers. De herbruikbaarheid en het geconcentreerde 50x-formaat ondersteunen ook kostenbeheersing: met één fles kom je een heel eind, en een sterke buffercapaciteit betekent minder swaps in het midden van een run.

Best practices voor snelle nucleïnezuurelektroforese

• Giet en voer uit met dezelfde 1x batch voor consistentie.

• Begin bij 25 V/cm en ga dan naar 30 V/cm als je opstelling dit toelaat.

• Bekijk de buffertemperatuur bij langere reeksen runs; Koel als dat nodig is.

• Houd de spanning onder de 200 V als u een TAE/TBE-cast gel in de snelle buffer laat vallen; Zeer hoge spanningen kunnen in dat scenario de resultaten verstoren.

• Waar het schittert

Korte verificatieruns, snelle controles tijdens het klonen, het screenen van tientallen PCR-amplicons en het versnellen van RNA-workflows die doorgaans onder traditionele systemen kruipen. Als uw team meer tijd besteedt aan het wachten op gels dan aan het handelen naar resultaten, is de winst onmiddellijk.

Fina Gedachten

Klaar om uw tijd voor nucleïnezuurelektroforese terug te brengen tot 10 minuten - zonder in te boeten aan helderheid of herstel? Praat vandaag nog met Longlight Technology om een monster aan te vragen, een SOP-sjabloon te krijgen of de compatibiliteit voor uw gelbox te beoordelen. Laten we gelruns van knelpunten omzetten in een snel checkpoint en uw experimenten in beweging houden.